辐射的方法

将裸鼠装入自制的有机玻璃盒中，拔出含有肿瘤的后肢并用绳子固定。肿瘤部位暴露于电场中心，距离电场边缘超过1厘米。照射的上部和下部填充2厘米长的油纱，小鼠身体的其余部分位于场外。

显微18F-FDG正电子发射/计算机断层扫描成像

治疗一天后，用1%戊巴比妥钠麻醉小鼠。尾静脉注射造影剂(18F-FDG)150至200 uCi后，进行正电子发射断层扫描/计算机断层扫描(PET/CT)，扫描时间为20分钟。应用校正因子后，获得了代表18F-FDG分布的图像。人工绘制了覆盖整个肿瘤的感兴趣区(ROI)。此外，还在对侧脊柱旁肌肉上绘制了ROI。测定肿瘤部位和对侧脊柱旁肌肉的标准摄取值(SUV)。肿瘤的最大SUV与对侧脊髓旁肌肉的最大SUV之比代表T/M(肿瘤的最大SUV与对侧脊髓旁肌肉的最大SUV之比)值。

用于检测肿瘤组织氧分压的溶氧微电极

Unisense氧气微电极是一种带有保护阴极的微型克拉克型溶氧微电极。在本研究中，小鼠安乐死后，立即取出肿瘤组织并测量肿瘤长轴和短轴。每个肿瘤分4部分测量，包括1/16短轴、1/8短轴、1/4短轴和1/2短轴。测量每个部分的平均值后，将4个部分的氧分压平均值视为肿瘤组织的氧分压。每只小鼠从死亡到测试的总时间不超过5分钟。

肿瘤标本中的VEGFR-2磷酸化和CD31免疫组化检测

在石蜡包埋前，肿瘤组织用10%福尔马林溶液固定。所有实验均严格按照生产商的指南进行。在400倍放大镜下进行显微评估，结果显示细胞膜或细胞质呈现棕黄色或棕色，表明p-VEGFR-2在细胞膜或细胞质中表达。从每个切片中随机选取5个切面，计算每个视野细胞中阳性细胞的百分比。5个百分比的平均值即为切片中p-VEGFR-2阳性细胞的百分比。

微血管密度(MVD)按照Weidner等人描述的方法进行定量。首先，在低倍放大镜(100倍)下进行筛查，扫描肿瘤区域，找出血管最密集的区域，称为"热点"。在这些热点区域，使用高倍放大镜(400倍)对微血管进行计数。MVD表示为每个视野中的微血管数量。通过CD31染色鉴定的内皮细胞与相邻的微血管、肿瘤细胞或结缔组织明显分离的细胞被视为微血管。每个切片选择5个热点进行微血管计数，平均值代表该切片的MVD。

结果

阿帕替尼联合放疗的抗肿瘤效果

图1肿瘤生长曲线。治疗后1至18天裸鼠异种移植肿瘤的平均体积；*P<0.05与对照组相比，**P<0.05与单个治疗组相比。

当肿瘤平均体积达到150至200mm3时，采用不同的治疗方法。图1显示了治疗后1至18天各组肿瘤异种移植物的平均体积，并对所有组进行了统计分析。与其他组相比，对照组的肿瘤生长速度加快(P<0.05)。12 Gy组的抑制效果优于6 Gy组(P<0.05)。此外，6 Gy组与阿帕替尼组之间没有差异(P>0.05)。此外，与阿帕替尼治疗或单独放疗相比，阿帕替尼+放疗联合组对小鼠肿瘤生长的抑制作用更强(P<0.05)。

表1肿瘤抑制率

表1列出了各治疗组的肿瘤体积和抑制率。阿帕替尼、单独6 Gy、单独12 Gy、阿帕替尼+6 Gy和阿帕替尼+12 Gy的肿瘤抑制率分别为33.3%、38.8%、61.5%、63.8%和85.9%。因此，与单独使用阿帕替尼或放疗组相比，阿帕替尼+放疗的抑制率更高(P<0.05)。阿帕替尼+6 Gy的Q值为1.079(Q值为0.85-1.15)，表明阿帕替尼+6 Gy的治疗效果包括了2种单独治疗的加成。阿帕替尼+12 Gy的Q值为1.156(Q值大于1.15)，表明阿帕替尼+12 Gy的治疗效果与单独治疗效果相比具有协同作用。由于两组联合治疗的Q值均大于0.85，因此认为阿帕替尼联合放疗对治疗鼻咽癌具有协同作用。

显微18F-FDGPET/CT成像

图2显微18F-氟脱氧葡萄糖(FDG)正电子发射断层扫描/计算机断层扫描(PET/CT)成像。A、小鼠接受不同治疗方案一天后的代表性18F-FDGPET扫描图。B、与不同治疗方案相关的T/M(肿瘤最大SUV与对侧脊柱旁肌肉最大SUV之比)。与对照组相比，*P<0.05。与阿帕替尼组(6 Gy)相比，***P<0.05。与阿帕替尼组(12 Gy)相比，***P<0.05。

在治疗方案结束后的第二天进行了正电子发射断层扫描/CT检查，裸鼠移植鼻咽癌的PET/CT成像结果如图2所示。对照组小鼠的肿瘤代谢率明显高于治疗组小鼠(P<0.05)。此外，与6 Gy处理的小鼠相比，12 Gy处理的小鼠的肿瘤代谢率较低(P<0.05)。与单独使用阿帕替尼或放疗的小鼠相比，阿帕替尼和放疗联合治疗的小鼠的肿瘤代谢率更低(P<0.05)。因此，我们认为阿帕替尼联合放疗对鼻咽癌的肿瘤代谢具有协同抑制作用。