ZnPBA NCs的体外ROS清除活性：

为了评估ZnPBA NCs针对氧化应激的细胞内ROS清除活性，将RAW264.7和MRC-5细胞以每孔1×105个的密度播种到96孔板中。培养24小时后，用PBS洗板两次。然后将含有250μMH2O2、350μMtBHP或100ng/ml LPS的新鲜DMEM与不同浓度（0、25、50或100μg/ml）的ZnPBA NCs一起加入细胞中。对96孔板中的RAW264.7和MRC-5细胞在6小时内进行CCK-8检测。

细胞凋亡检测实验将RAW264.7和MRC-5细胞接种到共聚焦培养皿中培养24h，然后用PBS漂洗两次，并加入含有350μMH2O2和100μg/ml ZnPBA NCs的新鲜DMEM。培养6小时后，弃去上清液，再用PBS冲洗细胞两次。将100μl结合缓冲液、5μlAnnexin V-FITC和5μl PI溶液加入细胞中。室温共孵育15分钟后，加入400μl结合缓冲液进行共聚焦激光扫描显微镜观察。对于DCFH-DA检测试剂盒，向细胞中加入100μl含有5μl DCFH-DA染料的上样缓冲液，孵育30分钟。然后，用HBSS冲洗细胞两次，并补充100μl HBSS进行共聚焦观察。同样，在对RAW264.7细胞进行AnnexinV-FITC/PI染色和DCFH-DA染色之前，分别用350μMH2O2和不同浓度（0、50、100μg/ml）的ZnPBA NCs进行预处理，然后进行流式细胞仪分析。

实时定量反转录聚合酶链反应:

通过RT-qPCR评估了抗氧化、炎症和细胞凋亡相关基因的表达。简言之，将RAW264.7细胞播种到培养皿（100平方厘米）中培养24小时。然后用PBS冲洗细胞，并加入含有PBS、350μMH2O2或350μM H2O2+100μg/ml ZnPBA NCs的新鲜DMEM共同培养6小时。然后，将细胞总RNA保存在RNAsolid™中，并反转录成互补DNA（cDNA）。使用SOD1、SOD2、GPX4、CAT、NF-κB、INOS、BAX、BAK1、APAF1和caspase3的目标引物对cDNA样品进行RT-qPCR。使用CFX Connect™Real-Time PCR检测系统（Bio-Rad）进行实时荧光定量。以对照组（仅PBS处理）的基因表达水平为标准进行归一化。基因表达的定量基于循环阈值比较法。

ZnPBA NCs的体外抗菌性能:

为了研究ZnPBA NCs的抗菌性能，研究对象包括大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、肺炎双球菌和绿脓杆菌。这些细菌细胞在标准的LB肉汤中培养，培养温度为37◦C，200rpm，振荡。然后，将50μl细菌悬浮液（接种后培养12小时）加入2mlLB肉汤中，在6孔板中培养2小时。然后，在每个孔中分别加入0、5、10、25、50、100μg/ml的ZnPBA NCs，继续培养6小时。收集剩余细菌，用PBS冲洗两次，然后接种到平板中进行菌落计数。相对细菌数按以下公式计算。

其中CFUcontrol和CFUsample分别代表对照组（0μg/mlZnPBA NCs）和实验组（5、10、25、50、100μg/mlZnPBA NCs）的菌落数（CFUs）。

使用或不使用ZnPBA NCs处理的细菌样品均用2%戊二醛溶液固定12小时，然后用PBS洗涤三次。然后用1%渗透酸固定样品，并在梯度乙醇水溶液（10%、30%、50%、70%、100%）中脱水。然后将样品渗透到环氧树脂中，切成超薄切片，用醋酸铀染色，最后进行TEM观察。

ZnPBA NCs的体内生物相容性:

所有动物实验均按照上海市第十人民医院实验动物伦理委员会的指导原则进行。雌性ICR小鼠（6周龄）和balb/c小鼠（8周龄）购自上海实验动物中心。在体内生物相容性实验中，20只雌性ICR小鼠被随机分为四组：对照组（无任何处理）、气管内PBS组（气管内灌入25μlPBS）、静脉注射ZnPBA NCs组（静脉注射100μl和200μg/mlZnPBA NCs）和气管内ZnPBA NCs组（气管内灌入25μl和200μg/mlZnPBA NCs）。小鼠经上述处理后，继续饲养24天，每3天称重一次。实验结束后，抽取小鼠眼球血液进行标准血液学分析和血液生化分析。然后用无痛颈椎脱臼法处死小鼠。收获小鼠的主要器官（心、肝、脾、肺和肾）进行H&E染色。

ZnPBA NCs的体外溶血分析:

从SD大鼠的眼眶静脉采集新鲜全血样本。血液样本在1000rpm转速下离心15分钟以收集红细胞，然后用生理盐水轻轻洗涤三次，直至上清液呈无色透明状。然后，用生理盐水将红细胞稀释成2wt%的悬浮液待用。然后，将900μL稀释后的红细胞悬浮液与100μL不同浓度（0-50μg/mL）的ZnPBA NCs悬浮液混合。生理盐水和去离子水分别作为阴性和阳性对照。混合后的分散液在37℃下培养3小时，然后在10,000g转速下离心15分钟：

ZnPBA NCs的体内生物分布分析:

ZnPBA NCs的生物分布通过体内成像系统进行成像。用柠檬酸三钠修饰的ZnPBA NCs（100μg/mL）用Cy7-NH2（0.1%，V/V%）标记，称为ZnPBA-Cy7。然后，给8周大的Balb/c小鼠气管内灌入50μL的ZnPBACy7，记录给药后1、2、4、6和8h的体内荧光图像。同时，在给药后的2、4和8h，另两只受试小鼠被处死，以进行主要器官解剖和生物分布记录。

ZnPBA NCs对急性细菌性炎症的体内治疗作用:

通过气管内灌注肺炎克氏菌（25μl，6×106CFU/ml）建立了急性细菌性炎症小鼠模型。在模型建立的4小时内，还向小鼠气管内灌入ZnPBA NCs（25μl，100μg/mlZnPBA NCs）。模型建立后24小时，记录小鼠体重。评估结束后，从小鼠眼球抽取血液进行标准血液学分析和血液生化分析。然后用无痛颈椎脱臼法处死小鼠。取不同治疗组小鼠的肺组织进行H&E染色和抗CD45抗体免疫染色。用ImageJ对光学密度曲线进行量化。另外，肺湿重/干重比是根据肺湿重（取出后立即称重）与肺干重（在60◦C下干燥48小时后）之比计算得出的。

血清细胞因子和肺细胞因子水平:

用ELISA法检测血清和肺组织中的细胞因子：IL-1β、IL-6和TNF-α。血液经6000g、10分钟离心后收集血清，肺组织用PBS研磨后制备肺组织悬液。ELISA检测按照制造商的说明进行。

体内DHE染色:

将不同组小鼠的肺组织切片立即转移到液氮中。将这些样本包埋在20◦C的最佳切割温度下进行低温切片，切片厚度约为5μm。在37◦C温度下用DAPI和DHE对冷冻肺组织染色30分钟，然后用PBS冲洗两次以去除过量染料。这些切片由荧光显微镜成像。

ZnPBA NCs的体内抗菌性能：

将肺匀浆涂抹到LB琼脂平板上，对肺组织悬浮液中的细菌菌落进行计数。用ImageJ计算剩余细菌的菌落数。